ELISA试剂盒检测血清的详细留意事项

ELISA试剂盒检测血清的详细留意事项

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。

在检测时，受检标本（测定其中的抗原）与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体，通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

1. 要留意防止呈现严峻溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因而，在以HRP为符号酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很简单在温育过程中吸附于固相，然后与后边参加的HRP底物反应显色。

2. 冰冻保存的血清标本须留意防止因停电等形成的重复冻融。标本的重复冻融所发生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子发生损坏效果，然后引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应留意，不要进行剧烈振荡，重复倒置混匀即可。

3. 标本在保存中如呈现细菌污染所造成的的混浊或絮状物时，应离心沉积后取上清检测。

4. 样本的收集及血清别离中要留意尽量防止细菌污染，一则细菌的成长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白发生分化效果;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作符号的测定方法发生非特异性搅扰。

5. 血清标本如是以无菌操作别离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则主张冰冻保存。样本的长期保存，应在-70℃以下。