特点优势:

1.所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经自建底大效据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段可实现对细菌种属及血清型的特异检制,特异性均达到。

2.重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性强。

3.灵敏性:读系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。

4.检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。

5.序列资源丰富,除公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。

该系列试制盒均经过大量的保守性及特异性实验证,凭借公同拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试制盒均经过了20余种标准菌株和临床菌样的保守性验征及40余种近缘准菌株和临床菌株的特异性验证确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。

组成及配制

1、酶标板:-块(96孔)

2、标准品 (冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5m1,盖好后室温静置大约10分钟,同时

反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L, 然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/

L, 100 U/L,50 U/L,25 U/L, 12.5 U/L,6.25 U/L,3. 12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不 要少于0.3m1 )200 U/L的 上述标准品加入含有0. 3m1样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

技术原理:

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酵与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。

在聚合酶错式反应实验中发现。DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本, PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。

样本采集、存放及运输:

1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集。

2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(多冻融3次)。

3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。

使用方法:

注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。

1. 样本处理(样本处理区)

待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书。阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。

2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)

取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。

组分每头份用量FMD  RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。

1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。

2.加样(样本处理区)

3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。

注意事项:

1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。

2. 试剂Buffer AL若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀,混匀后再使用。

3. 电泳检测时,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则,电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。

4. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率佳。

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。