菌种的培养:

1.菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下, 经过扩大培养成为具有一-定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进-步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25^ 28C培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%" 20%。

保存方法:

传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量。覆盖保存法:该法较前一-种方法 保存菌种的时间更长,产品仅用于科研适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

悬液保存法:

①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注

意避免水分的蒸发。

②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或shi盐水等进行保存。

载体保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。

常用的冷冻保存法:

1.低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃) :低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ 5mm的珠来吸附菌液,然后把珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。

2.干冰保存法(-70℃左右) :即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。

3.液氮保存法(-196℃) :是适用范围最广的微生物保存法。

保藏方法:

1传代培养保藏法

又有斜面培养、穿剌培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6°C冰箱内保存。.

2.覆盖保藏法

是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌, 一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。

3.载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4.寄主保藏法.

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内并传代,此法相当于-般微生物的传 代培养保藏法。.等微生 物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5.冷冻保藏法

可分低温冰箱(-20-30℃, -50-80℃) 、干冰酒精快速冻结(约-70℃和液氮(-196°C)等保藏法。

6.冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备悬液,以防止因冷冻或水分不断升华带来的损害。