ELISA试剂盒检测概述

ELISA (酶联接免疫吸附反应分析)是以免疫学反应为基础,将抗原、抗ti的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一-种敏感性很高的实验技术。由于抗原、 抗ti的反应在一种固相载体-聚苯Z烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗ti的间接法、用于检测抗原的双抗ti夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗ti夹心法及ELISA间接法服务。

实验过程:

1.试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请 使用一次性的吸头,避免交叉污染。

2.加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本/标准品,酶结合物或底物时,第yi个孔与最hou-一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育“时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品) 将控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。

3.孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态:同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4.洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响最hou的酶标仪读数。

ELISA试剂盒操作注意事项:

1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法:

1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液

5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。

试剂和样本的控制方法:

一、试剂

1.试剂的选择:国家明确要求要采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关,我司严格按照国家标准进行生产,已获得国家承认的“三证”,每一个产品都有对应的生产批号,只要客户提前下单,我们就能为您提供新批次的产品,不必担心会有过期的试剂。我司的试剂,值得您选择。

2.试剂的准备:先将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20-30 min后,再进行测定,使试剂盒在使用前与室温平衡,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度,以满足后面的测定需求。

二、样本

1.内源性干扰因素:包括类因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等;

类因子的控制方法:

①用F(ab)2替代完整的IgG;

②标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理;

③检测抗原时,可用2-巯ji乙醇加入到标本稀释液中使RF降解;

补体的控制方法:

①用EDTA稀释标本;

②56℃ 30 min加热血清使C1q灭活;

2.外源性干扰因素:包括标本溶血、细菌污染、保存时间过长或凝固不全等;

控制方法:采血时规范操作,采集的血液勿用力震荡,以防溶血;收集标本时采用无菌试管,经检测后再低温冻存;保存时间不宜过久,检测时尽量采用新鲜标本;对于凝固不全的血标本可适当加入抗凝剂,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再离心分离血清。

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