ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学 调查。本法不仅可以用来测定抗ti,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,

免责声明

试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

产品特点

一、高效、灵敏、特异的抗ti;

二、稳定的重复性和可靠性;

三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液 等等多种标本类型;

五、节省实验经费。

elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为29.8mg/L,则认为回收率为99%。

组成结构

1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内du素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞 迅速小心地分离。

2、血浆:EDTA、柠檬suan盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。

5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂盒成分

1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T

2 酶标记抗ti: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1

3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2

4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1

5 标记抗ti稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1

6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1

7 终止液: 1N硫suan 12mL x 1

8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗ti和显色剂)

标本要求 :

1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍) 后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(xnx5)

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

1. 夹心法:

夹心法常用于检测大分子抗原,一般的操作步骤为:

a. 将具有专一性的抗ti固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗ti

b. 加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结

c. 洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一的一次抗ti,与待测抗原进行键结

d. 洗去多余未键结一次抗ti,加入带有酶的二次抗ti,与一次抗ti键结

e. 洗去多余未键结二次抗ti,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果

原理:针对抗原分子上2个不同抗原决定簇的单克隆抗ti分别作为固相抗ti和酶标抗ti,将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物。

2. 间接法

间接法常用于检测抗ti,一般的操作步骤为:

a. 将已知的抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待测检体,检体中若含有待测的一次抗ti,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。

c. 洗去多余待测检体,加入带有酶的二次抗ti,与待测的一次抗ti键结。

d. 洗去多余未键结二次抗ti,加入酶底物使酶呈色,藉仪器(ELISA reader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值),以评估有色终产物的含量即可测量待测抗ti的含量。

原理:利用酶标记的抗抗ti以检测已与固相结合的受检抗ti。

3. 竞争法

竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为:

a. 将具有专一性的抗ti固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗ti

b. 加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结

c. 加入带有酶的抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结,由于塑胶孔盘上固著的抗ti数量有限,因此当检体中抗原的量越多,则带有酶的抗原可键结的固著抗ti就越少,亦即,两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗ti键结,即所谓竞争法之由来。

d. 洗去检体与带有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,当检体中抗原量越多,代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少,显色也就越浅。

e. 当需要侦测无法获得两种以上单一性抗ti的抗原,或是不易得到足够的纯化抗ti以固著于孔盘上时,一般会考虑使用竞争法ELISA。

[说 明]

1.由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析,本产品可能存在一定的质量 技术风险。

2.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及 当时的实验环境密切相关,请务必准备充足的标本备份。

3.不同批次的同一产品可能会有少许差别,如:检测限、灵敏度以及显色时间等,请依据试剂盒内说明书进行实验操作,网站电子版说明书仅作参考。

4.只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果,不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到 的检测结果。

5.本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。

6.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。

7.若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况。

8.某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与本产品所使用的检测抗ti及捕获抗ti不匹配,而不被检测出。

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