ELISA试剂盒实验常见问题总结

发表时间：2023-04-03

ELISA试剂盒实验做了很多次，可是结果还是有偏差？可能很多同学都会出现这样的问题，那么问题到底出在哪呢，今天小编就来给大家总结一下，ELISA试剂盒实验中会经常遇见的问题。

一、ELISA试剂盒简介

酶联免疫吸附测定是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。

二、ELISA试剂盒的应用

1.免疫酶染色各种细胞内成份的定位。

2.研究抗酶抗体的合成。

3.显现微量的免疫沉淀反应。

4.定量检测体液中抗原或抗体成份。

三、ELISA试剂盒实验疑难问题解答

1.非正常的样本值

①不正确的收集或保存

解决方案：确保正确的底物体积混合。如果底物是冻干粉，用相应缓冲液重悬*，充分混合并在一定时间内使用。

②不正确的样本制备

说明书中样本制备方法已经过性能测试验证，严格按照说明书推荐进行。确保使用正确的校正稀释液。

2.信号强度增长不充分

①底物准备有误

解决方案：确保正确的底物体积并混合。如果底物是冻干粉，用相应缓冲液重悬，充分混合并在一定时间内使用。

②每孔底物添加体积有误

解决方案：保证移液器正常工作，必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。

③孵育时间或温度有误

解决方案：严格按照推荐的孵育时间和温度进行实验，避免在环境条件变化的位置孵育96孔板（如放在通风处或窗台边）。

④偶联物或底物准备有误

解决方案：确保混合相同体积的偶联物和底物。加入后会立即显色。底物在使用前应避光保存。

⑤仪器设置不正确

解决方案：确保酶标仪使用了正确的滤光片，确保按照说明书，正确的配置仪器参数。

3.边缘效应

①工作台温度不均衡

解决方案：避免在环境条件变化的位置孵育，如放在通风处或窗台边。

②体系液体蒸发

解决方案：保证移液器正常工作，必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。

③叠板孵育时避免叠板。